计算单一浓度 |
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要为浓度计算器设置恰当的参数，选择View(查看)→Tools(工具)→Concentration Calculator(浓度计算器)命令。
要计算单一浓度:
| • | 调出Concentration Calculator(浓度计算器)对话框的Individual(单一)标签(图13.1)。 |
图 13.1 Concentration Calculator - Individual Tab (浓度计算器 - 单一浓度标签)
| • | 使用File to analyze(要分析的文件)下拉列表来选择要进行浓度计算的FCS文件。可以通过选择Gate to analyze(要分析的门)列表框来只对一部分细胞进行计算。 |
| • | 选择计算体积的方法: Reference beads(对照微珠)或者Time(时间)(参见下方)。 |
| • | 点击Calculate(计算)来计算实际浓度。试样体积会显示在Volume Analyzed(分析过的体积)字段，浓度会显示在Sample Concentration(样品浓度)字段。 |
| • | Calculating Volume from Reference Beads(根据对照微珠计算体积) |
在试样中添加已知浓度的微珠是一个常用的计算试样体积的方法。通过数出在样品测试期间采集了多少微珠，可以计算出样品的体积。
| o | 在打开Concentration Calculator(浓度计算器)对话框前，在二维绘图上微珠区域画一个门。 |
| o | 选择Reference Beads(对照微珠)单选按钮。 |
| o | 在Bead Gate(微珠门)字段输入门的编号。 |
| o | 在Bead Concentration(微珠浓度)字段输入微珠的浓度。微珠的浓度单位必须是beads/ml(微珠/毫升)。浓度可用科学计数法(比如，5 x 106/ml可输入为5e6)。 |
| • | Calculating Volume by Time(根据时间计算体积) |
在有些设备中，鞘液的流速是设定好的。如果知道流速和数据采集的时间，就可以计算体积。
| o | 在Flow Rate(流速)字段键入流速，单位是ml/min。 |
| o | Start Time(开始时间)和End Time(结束时间)字段从FCS文件头部分的数据自动获取。如果这些时间不对，可以自己输入开始和结束时间。Total Time(总时间)由开始时间和结束时间的差别决定。也可以直接输入总时间。 |