细胞分裂分析
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荧光细胞染色和细胞分裂跟踪染料可以用来监测细胞分裂过程中的分裂次数和找出细胞分裂和分化的关系。
荧光跟踪染料主要分为两种:
• | 标记一般蛋白质染料 |
用来标记一般蛋白质的染料(例如CFSE(羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯))和细胞蛋白质中的氨基生成随机的共价键,属于高强度非渗透性细胞膜标记荧光分子。CFSE荧光强度很高,受488nm激光激发后,在515nm的"绿色"波段发出荧光。
• | 一般性的膜结构标记染料 |
一般性膜结构标记染料,例如PKH和Cellvue是亲脂性化合物,它们可以牢固地、不通过共价键地插入细胞膜中。一般性的膜标记染料在荧光强度上有所差异;染料的颜色有多种,可用来做多颜色实验。
每次细胞分裂,颜料基本上会平均分配到两个子细胞中。因此,颜料荧光强度可用来衡量一个细胞已经分裂的次数。
染色之后,细胞群被定期经由流式细胞仪分析。最后可生成一个柱状图,用细胞数目对荧光强度作图。一般来说,细胞分裂染料可以用来跟踪8次细胞分裂,之后染料的荧光强度会降到未被染色的细胞自发荧光水平。
FCS Express的细胞分裂插件包(Proliferation Add-on)提供了一套曲线拟合算法,来检测分裂细胞的比例。