设置微珠门
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在本节中,我们将:
• | 学习如何使用有层次的门操作来在微珠上应用门。 |
要想更多地了解如何插入绘图,请参见教程中的修改章节。
1. | 请打开一个新的空白版面。 |
2. | 请插入一个前向为FSC-H参数、侧向为SSC-H参数的点状图文件Monocytes.002(在FCS Express Sample Data(FCS Express样本数据)文件夹中)。 |
3. | 请在单核细胞周围创建一个多边形门,并把它命名为Monocytes(单核细胞)(图T22.1)。 |
4. | 请在微珠周围创建一个进行门,将其命名为Beads1(微珠1)(图T22.1)。 |
这些门看起来应该如图T22.1中的左图所示。要想更多地了解如何创建门,请参见门操作教程。
5. | 请再创建一个点状图,来显示FL1-H与SSC-H的绘图(图T22.1)。 |
6. | 请将Beads1(微珠1)门应用到新绘图上。要想更多地了解如何应用门,请参考门操作教程。 |
7. | 请在微珠周围画一个矩形门,将其命名为Beads2(微珠2),如图T22.1中的右图所示。 |
图T22.1 Gates for Monocytes and Beads (单核细胞以及微珠门)
Beads2(微珠2)门进一步将细胞与微珠区分开来。根据样本中细胞与微珠的分离程度,用户可以只使用一个门,但是使用两个门往往可以更干净地把微珠事件分开。
我们现在要把Beads2(微珠2)门设置为Beads1(微珠1)门的子门。这会使Beads2(微珠2)门中的事件从Beads1(微珠1)门中的事件中进一步筛选。这类似于一个组合门: "Beads1 AND Beads2(微珠门1 "与" 微珠门2)"。
8. | 请选中Insert(插入)→General(常规)→Gate View(门视图)命令(图T22.2)。 |
9. | 请在版面中你想要插入Gate View(门视图)窗口的位置左键点击。 |
图T22.2 Gate View Command (门视图命令)
这时会出现Gate View(门视图)窗口,如图T22.3所示。
图T22.3 Gate View (门视图)
10. | 请把光标放在Gate View(门视图)窗口上的Beads2(微珠2)门(图T22.3)。 |
11. | 请按下鼠标左键不放,把Beads2(微珠2)门拖到Beads1(微珠1)门的上方。 |
12. | 请松开鼠标,把Beads2(微珠2)门放到Beads 1(微珠1)门上。 |
这时的Gate View(门视图)应该看起来如图T22.4所示。
图T22.4 Gate View with Child Gate (带有子门的门视图)
现在Beads2(微珠2)门已经是Beads1(微珠1)的子门了,如图T22.4所示。
在下一节中,我们将使用浓度计数器工具。