拟合参数选项 |
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如果运算规则发现有很大一群事件是噪音信号(细胞分裂柱状图上的浅蓝色)，用户可以修改Proliferation Fit Parameters(细胞分裂拟合参数)来改进模型的拟合。
要对细胞分裂柱状图上的拟合参数进行格式化:
| 1. | 右键点击细胞分裂柱状图，然后从弹出菜单中选择Format(格式)。 |
| 2. | 点击Proliferation(细胞分裂)旁边的三角来展开该命令区。 |
| 3. | 要修改拟合模型，选择Fit Parameters(拟合参数)选项区(图25.2)。 |
图25.2 Formatting Proliferation Fit Parameters (格式化细胞分裂拟合参数)
在Fit Parameters(拟合参数)一页，用户可以修改和算法相关的一系列属性，包括:
| • | 选择要计算的Maximum number of peaks(最多数据峰的数目)。 |
| • | 决定是否使用Fixed CV(固定变异系数)和/或Same CV for All Peaks(所有数据峰使用相同的变异系数)。 |
| • | 使用Fixed Peak Ratio(固定的数据峰比率)和/或Same Peak Ratio for All Peaks(所有数据峰有相同的数据峰比率)。 |
| • | 为Fixed Starting Generation(固定起始细胞代数)和/或Background Noise(背景噪音)设置参数。 |
以下是一个拟合算法工作原理的简单描述，它可以帮助用户设置以上属性:
| • | 拟合过程首先找到尚未分裂的细胞群在哪里。尽管用户可以手动设置寻找峰值，拟合过程可自动进行该步骤。在一些情况下，用户必须手动设置该项，因为可能细胞群中没有尚未分裂的细胞。 |
| • | 找到未分裂的细胞群后，该模型会寻找荧光值彼此降低了50%的那些细胞群。因为不是所有实验均按理论进行，模型会从50%这个数值点开始检查，但也会左右稍微移动一些来锁定真正的数据峰。可通过使用Same Peak Ratio for All Peaks(为所有数据峰选择相同的比率)选项来控制该操作。 |
| • | 要找到一个数据峰，该模型在对比未分裂细胞基础上，做出一些假设。可用Same CV for All Peaks(所有数据峰使用相同的变异系数)选项控制这些设置。 |
| • | 如果提供一个背景荧光数值，该模型可从所有计算中减去背景荧光。 |
| • | 因为算法使用实际的柱状图轮廓来进行拟合，柱状图数据不应该做平滑处理。只有在特殊情况下，例如当原始数据噪音很大时，才应该使用一点平滑处理，以使模型更好地拟合数据。 |
| • | 这些选项的存在是为了在模型中可以包含广泛的数据来源和生物行为。因此，要获得最好的拟合，开始的正确设置很重要。在实践中，该过程常常是用尝试法，直到参数设置可提供最好的拟合为止。 |
| • | 两种检查拟合好坏的方法是眼睛观察(做一个大概批判)和细胞分裂拟合统计。 |