柱状图减法运算工具
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柱状图减法运算，通过样本柱状图减去阴性对照柱状图，能够让用户知道样本柱状图的阳性百分比。柱状图减法运算，可在个体柱状图中执行，也可在一系列柱状图中执行，它可自动计算并显示结构到统计窗口中。
要让柱状图减法运算自动执行，并将结果展示在统计窗口：
| • | 使用Format(格式)→Plot Options(绘图选项)→Specific Options(特定选项)命令(或者右键点击柱状图，然后选择Format(格式)，选择Histogram (柱状图)→Histogram Specific Options(柱状图特定选项)项目类别)。设置Control Histogram for Histogram Subtraction Statistics(柱状图减法统计的对照柱状图)域为适当的阴性对照(图141)。柱状图减法统计常使用Overton Subtraction(Overton减法)，描述如下。 |
Figure 14.1 Setting the Control Histogram in the Formatting Hisotgram Specific Options Dialog
要执行一个体柱状图减法运算，请选择Data(数据)→Calculate(计算)→Histogram Subtraction(柱状图减法)命令，此时，Histogram Subtraction(柱状图减法)窗口将显示(图142)。
Figure 14.2 Histogram Subtraction Window
可以为当前打开的任何FCS文件执行柱状图减法运算。请为对照柱状图和样本柱状图，在合适的位置选择File(文件)、Parameter(参数)和Control(对照)或者Sample Gate(样本门)选项。按下Calculate(计算)按钮，来执行柱状图减法。4种方法计算出的阳性百分比，通常Overton减法和Positive Difference(正差异)法计算出来的是最准确的。
可用以下方法计算% Positive(阳性百分比)：
| • | Channel by channel(通道对通道) |
在通道对通道的基础上，从样本柱状图中减去对照柱状图。换句话说，也就是用样本的N通道的事件数减去对照的N通道的事件数。用所以的阳性事件数(也就是，样本N通道的事件数比对照N通道的事件数多多少)，然后除以总的事件数，就得到阳性细胞百分比了。
| • | XPercent(X百分比) |
这一方法是，在对照细胞群的最大荧光处，设置一截止通道值，认为所以高于该值的就是阳性细胞。要确定截止通道值，就在Percent(百分比)标签字段处输入一值。如果您输入2，截止通道值是对照细胞的最高的前2%，或者第98个百分位。样本柱状图中，所有高于这一通道值得细胞，都被认为是阳性细胞。
| • | Overton Subtraction(Overton减法) |
除了在更低的通道中，添加负差异(在这个位置上，对照N通道的细胞数量大于样本N通道的细胞数量)到正差异中外，该方法和通道对通道减法相似。在分析完所有的通道后，将阴性结果调到0，然后用阳性细胞数除以总细胞数，就得到样本柱状图中的阳性细胞百分比了。
| • | Positive Difference(正差异) |
计算样本柱状图和对照柱状图N通道和N-1通道间，细胞的百分比，并计算这两个百分比之间的差异。这一差异被确定为通道1和它上一个通道间的N移动。计算出的最大的差异，就是阳性百分比。
在柱状图数据层的Overton减法结果中，包含了所以的阳性细胞。通过在Put Overton Output Histogram On(展示Overton输出的柱状图)字段处选择一已存在的柱状图，可将该数据层放置在一柱状图上。像对柱状图上的常规数据层一样，可对该数据层进行统计操作。