我们现在将使用在上一节中计算的线性回归公式来计算四个未知样本(即,FCS文件)的MESF数据..分析的目的是评估病人血清中结合到潜在捐献者B细胞和T细胞上的IgG的数量。
我们将使用的版面包括5页。第一页显示使用beads在上一节中计算的线性回归。第二页和第三页定义了阴性对照、阳性对照和病人样本。此MESF Calculations(MESF计算)页来完成线性回归和MESF数据工作。此Bar Plots(条形图)页来显示完整后的数据。
1. | 请在Tutorial Sample Data archive(教程样本数据库)中的Calculating MESF From Regression(从回归计算MESF)文件夹打开HLA CrossMatch.fey面板. |
2. | 点击MESF Calculations(MESF计算)页标签。 |
此页面包含两个电子表格(表1和表2),一个用于计算B细胞的MESF,一个用于计算T细胞的MESF。每个电子表格包含在第1页计算的“m”和“b”回归参数(图T27.14)。这样,两个参数都将在每个电子表格中使用单元格引用。此外,由于它们已被插入为统计标记,如果线性回归变化,它们将自动更新。
注意:我们将在本教程的“保存回归”部分中看到,线性回归参数也可以作为关键字添加到数据文件.即使在全新的版面允许使用回归参数,
Figure T27.14 - "b" and "m" parameter have been inserted into the spreadsheet.
MESF计算页面上的电子表格还包含四个样品中每一个的名称,平均荧光强度和log10转换后的平均荧光强度。
为了使用先前计算的线性回归模型计算所述未知样品的MESF,我们将需要:
• | 使用log10转换后的平均荧光强度(即线性回归的X变量)来计算遵循线性回归公式Y = mX + b的log10MESF值(即线性回归的Y变量) |
• | 将log10MESF值提升为十,以便计算实际的MESF值。 |
3. | 选择表1的G2单元格(即B单元格logMESF列第一个可用单元格). |
4. | 请输入=$B$2*F2+$B$3“(不带引号),其中$ B $ 2是”m“参数的绝对单元格引用,F2是”X“参数的相对单元格引用,$ B $ 3是”b“参数的绝对引用。 |
注意:可以通过鼠标选择感兴趣单元格将单元格引用插入到公式中。请参阅手册电子表格部分中的引用单元格。
5. | 点击键盘上的返回。该公式是实时计算的,电子表格看起来像图T27.22中的一个。 |
Figure T27.22
注意:如果双击单元格G2,单元格引用将突出显示,如图T27.23所示。
Figure T27.23
6. | 选择表1的H2单元格(即B单元格logMESF列第一个可用单元格). |
7. | 请输入=10^G2“(无引号),其中G2是相对于PBS阴性对照样品B细胞Log MESF值. |
8. | 点击键盘上的返回。该公式是实时计算的 |
我们现在将通过复制粘贴单元格G2和H2的内容来填充列G和H的剩余单元格。
9. | 同时选中多个单元格单元格G2和单元格H2. |
10. | 点击Ctrl+C在键盘上或者,右击选择Copy(复制)从右键单击菜单 |
11. | 选中多个单元格,从单元格G3到H5如图T27.4所示。 |
Figure T27.24 - Multiple cell selections.
12. | 点击CTRL+V在键盘上或者,右击选择粘贴从右键单击菜单单元格填充相应的值,电子表格看起来像图T27.25中显示的那样。 |
Figure T27.25 - The B Cell table completed.
我们将填充T细胞Log MESF和表2中T Cell MESF列,通过分别复制和粘贴表一中B细胞Log MESF和B细胞MESF的内容。
13. | 选中多个单元格,从单元格G2到H5如表1所示(即B细胞表),如图T27.26所示 |
14. | 选择单元格G2在表格2中(例如T细胞表格 |
15. | 点击CTRL+V在键盘上或者,右击选择粘贴从右键单击菜单 |
表2现在完成,如图T27.27所示
Figure T27.27 - The T Cell table completed.
要在条形图中查看表格中的结果(图T27.28),请点击Bar Plots(条形图)版面页(如果想要更多地了解如何创建条形图,请查看Bar and Scatter Plots tutorial(条形图和散点图绘图教程)).你会看到病人血清的B-Cell MESF数值比阴性对照略有提高,但远远在阳性对照下方。病人血清中的T-Cell MESF数值在阴性对照范围区间,也远远在阴性对照下方。
Figure T27.28 Bar Plots Displaying the FITC MESF HLA Cross Match Data from B- and T-cells