在这个教程中，我们将使用一个有二维密度图的版面，这些绘图中有七个数据文件对应的门，每个数据文件对应不同浓度的CD64抗体。请注意，您可以跳到下一节使用完整的电子表格插入带回归分析的散点图。
| 1. | 请选择File(文件)标签→Open From(从...打开)→Load Layout(下载布局)对话框。 |
| 2. | 打开建立在FCS Express Sample Data(FCS Express 样本数据)中的Titration.fey布局 在叫作Spreadsheet and Titration(电子文件和滴度)子文件夹下. |
这时，会出现以下版面，如图T17.1所示。
Figure T17.1 - Titration Layout
在版面的左上角是一个点状图(Side Scatter(SS) vs. Forward Scatter(FS))，图中有一个散点门，画在红色边框中。此Scatter(散点)门已经排除了那些很低和很高的信号。版面上的所有其它绘图都用该Scatter(散点)Gate(门)七个不同体积量的CD64添加到了外周血单个核细胞中，结果显示于七个点状图上。为了定义这个滴定实验中的阴性细胞群，在淋巴细胞群上已经画了一个门，如二维绘图“Lymphs“蓝色Lymphs(淋巴细胞)门所示。阳性细胞群(也就是单核细胞群)定义为紫色的Monos(单核细胞)Gate(门)在版面的左下角，是Gate View(门视图)窗口，显示“Lymphs“和Monos(单核细胞)门是Scatter(散点)门的子门，意味着这一数据第一次圈门是使用的是Scatter(散点)门，然后再进行“Lymphs“和Monos(单核细胞)门圈门。
我们将使用电子表格来计算七种CD64中使用的CD64信噪比的值。这些自定义标记将被定义为单核细胞(阳性细胞)CD64的平均荧光强度除以淋巴细胞(阳性细胞)CD64的平均荧光强度的比值。
| 3. | 请选择Insert(插入)→Spreadsheet(电子表格)→New(新)命令(图T17.2)。 |
Figure T17.2 - Opening new spreadsheet from ribbon
此创建新的电子表格窗口将出现在版面中。
| 4. | 在Name(名字)域输入 "Titration"(滴度)。 |
新的电子表格会显示在布局上。
对于此练习，我们将在以下信息使用填充电子表格：
Column (列)A -抗体加入量，
Column(列) B -CD64中位荧光强度的单核细胞群体，和
Column(列) C -CD64中位荧光强度的淋巴细胞群体。
| 10. | 按下Enter键。单元格A2将以蓝色概述(图T17.3)。 |
Figure T17.3 - Populating cell A1 of spreadsheet
单元格A2-8应该用抗体量填充(图T17.4)。
Figure T17.4 - Column A populated properly
要从列B填充单元格，我们将拖放SS Lin vs FL8 Log Color Dot(彩色点状)图到各个抗体量。
| 25. | 键入"Monos Median"(单核中位数)。 |
| 28. | 点击图边缘到电子表格单元格B2(图T17.5)。 |
Figure T17.5 - Drag and Drop Plot to cell B2 of spreadsheet
| 30. | 选择Statistic token(统计标记)从Paste Special(选择性粘贴)窗口(图T17.6)。 |
Figure T17.6 - Paste Special window to insert Statistic token
此Statistic(统计)页面将会出现(图T17.7)。
Figure T17.7 - Edit Statistic information for Monos
| 32. | 选择Monos(单核细胞)从Select Gate(选择门)下拉菜单中。 |
| 33. | 选择Y Median(Y轴中值)从Statistics(统计)列表框中。 |
| 35. | 重复步骤 27 - 34对以下颜色点图和电子表格单元格： |
0.313 ul CD64到B3,0.625 ul CD64到B4,1.25 ul CD64到B5,2.5 ul CD64到B6,5 ul CD64到B7和
10 ul CD64到B8.
电子表格应该如图T17.8所示。
Figure T17.8 - Columns A and B populated properly
列C通过将数据文件从数据列表拖放到电子表格上进行填充。
| 36. | 点击Data(数据)标签→Organize Data Sets(组织数据集)→Data List(数据列表)命令。 |
| 38. | 在数据列表中的任何数据文件上单击并按住鼠标。 |
| 39. | 拖拽数据文件到电子表格的单元格C1(图T17.9)。 |
Figure T17.9 - Drag and Drop Files from Data List to spreadsheet
此Statistic(统计)选项将会出现。
| 41. | 选择FL 8 Log从Data File Information(数据文件信息)下的Parameter(参数)下拉中. |
| 42. | 选择“Lymphs“从Select Gate(选择门)下拉菜单中。 |
| 43. | 选择Median(中值)从Statistic(统计)列表框中。 |
Figure T17.10 - Edit Statistic window for Lymphs
电子表格应该类似于下面的图T17.11。
Figure T17.11 - Columns A, B, and C populated properly
或者，门可以从每个点图被拖放到电子表格。
| o | 例如，单击并拖动紫色Monos门从彩色点图-0.156 ul CD64 SS Lin vs FL 8 Log到电子表格的单元格B2。 |
| • | 选择Y Median(Y轴中值)从Statistic(统计)列表框中。 |
门被更改时，电子表格中的值将会实时更新。
| • | 点击并按住布局上的图左上方红色Scatter(散点)门-10 ul CD64 SS Lin vs FS Lin. |
| • | 移动鼠标并观察电子表格中更改的值，当Scatter(散点)门移动时。 |
要调整列宽度，请按照以下两个命令之一：
| • | 将鼠标光标悬停在列标题的右边界上，直到调整大小光标出现( )→双击(图T17.13下左侧)。 |
| • | Spreadsheet(电子表格)标签组→布局标签→Format(格式)下拉菜单→AutoFit Column Width(自动条整改列宽)(在图T17.12下右侧)。 |
Figure T17.12 - Resizing single column width (left) or autofitting widths for entire spreadsheet (right)
我们现在将计算电子表格中单核细胞和淋巴细胞群体CD64染色的比例。
| 48. | 通过使用Insert(插入)→New Page (新页面)命令。 |
| 49. | 使用 View(查看)→Navigators(导航器)→Layout Navigator(布局导航器)命令来打开Layout Navigator(版面导航器). |
| 50. | 将布局导航器中的电子表格“滴定”从第1页拖放到第2页(图T17.13)。 |
Figure T17.13 - Moving Spreadsheet to Page 2
| 51. | 请选择View(视图)→Multiple Pages(多重页面)→Two Pages (Vertical)(纵向双页)命令。 |
| 56. | 按下Enter键。键入 "="到单元格D2. |
电子表格现在应该类似于图T17.14。
Figure T17.14 - Columns A, B, C, and D properly populated
