荧光细胞染色和细胞分裂跟踪染料可以用来监测细胞分裂过程中的分裂次数和检查细胞增殖和分化的关系。
荧光跟踪染料可主要分为两组:
• | 普通蛋白标记 |
用来标记一般蛋白质的染料,例如羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) ),它和细胞蛋白质中的氨基生成随机的共价键,属于高强度非渗透性细胞膜标记荧光分子。CFSE荧光强度很高,受488 nm激光激发后,在515 nm的“绿色”通道发出荧光。
• | 一般性膜结构标记染料 |
一般性膜结构标记染料,例如PKH和Cellvue是亲脂性化合物,它们可以牢固地、不通过共价键就可插入细胞膜中。一般性的膜标记染料在荧光强度上有所差异;染料的颜色有多种,可用来做多颜色实验。
每次细胞分裂,颜料基本上会平均分配到两个子细胞中。因此,颜料荧光强度可用来衡量任何细胞已经分裂的次数。
染色后,用流式细胞仪来检测固定时间间隔的细胞数目。然后可生成一柱状图,用细胞数目-荧光强度作图。一般来说,细胞增殖染料可以用来跟踪8次细胞分裂,之后染料的荧光强度会降到未被染色的自发荧光程度。
FCS Express Proliferation Add-on(FCS Express细胞增殖添加包)提供曲线拟合算法来检测分裂比例。
要更多地了解“细胞增殖分析”,请参考http://www.denovosoftware.com/site/ProliferationAnalysis.shtml网站.