手动补偿 |
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要手动地调整补偿:
| 1. | 请选择Application Button(应用程序按钮)→Open Layout(打开版面)。 |
| 2. | 请打开教程样本数据库中的ManualComp.fey版面。 |
该版面包括两个密度图。绘图FSC-SSC上有一个针对淋巴球的门。右边的绘图FITC-PE是在淋巴球门上的门(图T8.1)。
图T8.1 Uncompensated Plots (未补偿的绘图)
| 3. | 请右键点击右侧的二维绘图来调出弹出菜单。 |
| 4. | 请从弹出式菜单中选择Compensation(补偿)→Create New(创建新补偿)(图T8.2)。 |
图T8.2 Selecting Create New Compensation (选择创建新补偿)
这时会出现一个Create a new Compensation(创建新补偿)对话框(图T8.3)。
| 5. | 请在Enter a name for the new Compensation(为新补偿输入一个名称)字段输入"ManualComp"。 |
| 6. | 请取消对复选框Use this compensation as default on new plots(在新绘图上使用该补偿作为默认补偿)的点选。 |
| 7. | 请点击OK。 |
图T8.3 Create a new Compensation Dialog (创建新补偿对话框)
这时会出现Edit Compensation(编辑补偿)对话框(图T8.4)。
图T8.4 Edit Compensation Dialog (编辑补偿对话框)
| 8. | 请调整图T8.4中的滑动条，使二维绘图看起来如图T8.5。 |
请不要补偿过度！合适的补偿要求CD4 PE - % of CD4 FITC约在22.0%左右，而CD3 FITC - % of CD4 PE约在1.0%左右。向右移动滑动条将把细胞群沿着滑动条左边图中的箭头方向移动。
| 9. | 请点击OK来选择手动补偿设置。 |
图T8.5 Manual Compensation using Edit Compensation Sliders (使用编辑补偿滑动条进行手动补偿)
注意到补偿之后右下象限中CD3 FITC (+)细胞群的数字化错误。要纠正这个数字化错误:
10.请选择Data(数据)→Data Info(数据信息)→Compensation(补偿)→Compensation Info(补偿信息)命令(图T8.6)。
图T8.6 Selecting the Compensation Info Command (选择补偿信息命令)
这时会出现Compensation Info(补偿信息)对话框(图T8.7)。
图T8.7 Compensation Info Dialog (补偿信息对话框)
11.请选择ManualComp补偿矩阵。
12.请点击Edit(编辑)。
这时会出现Edit Compensation Definition(编辑补偿定义)对话框(图T8.8)。
图T8.8 Adding a Random Value when Converting Raw Data (转换原始数据时添加一个随机值)
| 13. | 请在Range of random value to add when converting log data(转换对数数据时添加随机值的范围)字段输入2.0(如图T8.8中的光标所示)。 |
| 14. | 请点击OK键，Edit Compensation Definition(编辑补偿定义)对话框将被关闭。 |
| 15. | 请点击OK键来应用Compensation Info(补偿信息)对话框中的设置。 |
这时右下象限中的FITC(+)细胞群将不再有数字化错误。前面插入的随机值用来纠正在二维绘图中的数字化数据显示错误(图T8.9)。
图T8.9 Compensation without Digitization Error (没有数字化错误的补偿)
在下一节中，我们将使用自动补偿。