定义自定义标记
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在这个教程中，我们将使用一个有二维密度图的版面，这些绘图中有七个数据文件对应的门，每个数据文件对应不同浓度的CD64抗体。任何时间，如果您想要跳到Create a Custom Data Table(创建自定义数据表格)章节，已完成教程中的步骤将出现在一个新的版面中，用以进行下一章节的学习。
| 1. | 选择File(文件)标签→Open From(从．．．中打开)→Open(打开)。 |
| 2. | 请打开FCS Express Sample Data(FCS Express 样本数据)文件夹中的Titration.fey版面。 |
这时应该出现如图T17.1所示的版面。
Figure T17.1 Titration Layout
在版面的左上角是一个点状图(Side Scatter(SS) vs. Forward Scatter(FS))，图中有一个散点门，画在红色边框中。此Scatter(散点)门已经排除了那些很低和很高的信号。版面上的所有其它绘图都用该Scatter(散点)门进行了圈门。七个不同体积量的CD64添加到了外周血单个核细胞中，结果显示于七个点状图上。为了定义这个滴定实验中的阴性细胞群，在淋巴细胞群上已经画了一个门，如二维绘图Side Scatter (SS Lin) vs. CD64 (FL 8 Log)绘图中的蓝色Lymphs(淋巴细胞)门所示。阳性细胞群(也就是单核细胞群)定义为紫色的Monos(单核细胞)门。在版面的左下角，是Gate View(门视图)窗口，显示Lymphs(淋巴细胞)门和Monos(单核细胞)门是Scatter(散点)门的子门，意味着这一数据第一次圈门是使用的是Scatter(散点)门，然后再进行Lymphs(淋巴细胞)门和Monos(单核细胞)门圈门。
我们现在要为在实验中使用的七个CD64体积创建一些自定义标记，以便计算CD64的信噪比。这些自定义标记将被定义为单核细胞(阳性细胞)CD64的平均荧光强度除以淋巴细胞(阳性细胞)CD64的平均荧光强度的比值。
| 3. | 选择View(视图)→Tokens(标记)→Custom Tokens(自定义标记)命令(图T17.2)。 |
Figure T17.2 Selecting the Custom Tokens Command
此时，Custom Tokens(自定义标记)窗口将出现在版面中。我们现在要把这个窗口停靠在版面的左侧。要学习如何停靠窗口，请查看“停靠教程”章节。
| 4. | 请把光标放在Custom Tokens(自定义标记)窗口的顶点边界上。 |
| 5. | 按下鼠标左键不放。 |
| 6. | 一直按着鼠标，拖动Custom Tokens(自定义标记)窗口到停靠箭头图标的左边箭头处。 |
| 7. | 当光标在停靠图标的左向箭头上时，请松开鼠标，如图T17.3所示。 |
Figure T17.3 Docking the Custom Tokens Window
此时，Custom Tokens(自定义标记)窗口就被停靠在了版面的左侧。现在让我们来定义自定义标记。要详细了解如何创建自定义标记，请参考“使用文本框和标记”教程。
| 8. | 请在Custom Tokens(自定义标记)窗口顶端边框上的"+"图标处左键点击，如图T17.4所示。 |
Figure T17.4 Creating a New Custom Token
此时，一个新的 Custom Token(自定义标记)会出现在Custom Tokens(自定义标记)窗口的上半部分，如图T17.5所示。
Figure T17.5 New Custom Token
| 9. | 请左键点击New Custom Token(新自定义标记)来对其进行编辑。 |
| 10. | 请输入"0.156 ratio"文本。 |
| 11. | 点击Enter键。此时，“0.156 ratio”高亮显示为蓝色。 |
| 12. | 请在Custom Tokens(自定义标记)窗口的下半部分，Enter Custom Token formula below(请在下方输入自定义标记公式)下方点击。 |
| 13. | 输入“=”(图T17.6)。 |
Figure T17.6 Beginning the Custom Token Formula
| 14. | 请在“=”后点击鼠标右键，来调出弹出菜单。 |
| 15. | 从弹出菜单中选择Insert Token(插入标记)，如图T17.7中的光标所示。 |
Figure T17.7 Insert Token Item from the Pop-up Menu
此时，Insert Token(插入一个标记)对话框将出现(图T17.8)。
| 16. | 选择Statistic(统计)，如图T17.8中的蓝色高亮所示。 |
| 17. | 点击Insert(插入)。 |
Figure T17.8 Insert a Token Dialog
此时，Create Statistic(创建统计)对话框中的Data Source(数据源)类别选项将出现，如图T17.9所示。在是我们为自定义标记选择数据源的地方。
| 18. | 选择Color Dot - .156ul CD64.fcs.DNS (SS Lin vs.FL 8 Log)，如图T17.9中的蓝色高亮所示。 |
Figure T17.9 Create Statistic Dialog -- Data Source
| 19. | 选择左边的Statistic(统计)类别选项，如图T17.9中的光标所示。 |
此时，Create Statistic(创建统计)对话框中的Statistic(统计)页面将出现，如图T17.10所示。
| 20. | 从Gate:(门:)下拉列表中选择Monos(单核细胞门)。 |
| 21. | 从Statistics:(统计:)列表框中选择Y-median(Y-中值)。 |
| 22. | 选择OK。 |
Figure T17.10 Create Statistic Dialog -- Statistic Category
此时，自定义标记"0.156 ratio"进行了更新，来反映所做的修改，如图T17.11所示。
Figure T17.11 Numerator Definition of Custom Token '0.156 Ratio'
我们现在已经创建了将来作为分子(也就是阳性细胞群)的“0.156 ratio”自定义标记。现在，我们要对自定义标记的分母，阴性细胞群，进行定义。
| 23. | 在自定义标记公式窗口中的“Statistic: Y Median for Plot #3, overlay #1, Additional Gate: Monos”文本后，输入'/'。注意："/"是除号，就像在微软Excel中的使用方法一样。 |
| 24. | 请选中“Statistic: Y Median for Plot #3, overlay #1, Additional Gate: Monos”文本。 |
| 25. | 请使用键盘上的Ctrl+C来复制所选文本。 |
也可以使用弹出菜单来复制文本。
| • | 选中标记之后，请右键点击，调出弹出菜单。 |
| • | 从弹出菜单中选择Copy Text(复制文本)选项。 |
| 26. | 请把光标放在"/"之后，然后右键点击。 |
| 27. | 请使用键盘键Ctrl+V来粘贴自定义标记文本。 |
或者，也可以使用弹出菜单来粘贴文本。
| • | 请在除号"/"之后右键点击，调出弹出窗口。 |
| • | 选择Paste Text(粘贴文本)选项。 |
这时，自定义标记公式进行了更新，来显示以上这些把分子复制到分母后的操作。现在让我们来编辑对分母的定义。
| 28. | 请在Custom Token(自定义标记)公式窗口双击刚刚粘贴的分母标记。 |
此时，Edit Statistic(编辑统计)对话框将出现，与之前的Create Statistic(创建统计)对话框类似，如前图T17.9所示。现在我们将使用Lymphs(淋巴细胞)门来修改这一定义；我们不需要编辑Data Source(数据源)页面，因为我们使用相同的绘图。
| 29. | 请从Edit Statistic(编辑统计)对话框中选择Statistic(统计)类别选项。 |
此时，Edit Statistic(编辑统计)对话框的Statistic(统计)页面将出现，与之前Create Statistic(创建统计)T17.10图中的Create Statistic(创建统计)对话框类似，但这次我们将选择Lymphs(淋巴细胞)门。
| 30. | 请从Gate:(门:)中选择Lymphs(淋巴细胞门)。 |
| 31. | 选择OK。 |
此时，针对“0.156 ratio”的自定义标记公式进行了更新，来反映以上所做的修改，如图T17.12所示。
Figure T17.12 Custom Token Formula for 0.156 ratio
现在我们要为0.313μlCD64数据创建一个自定义标记。但这次，我们将不使用复制和粘贴的方法来创建自定义标记，我们会直接把0.313μlCD64彩色散点图拖放到Custom Tokens(自定义标记)窗口的下半部分。
| 32. | 请在Custom Tokens(自定义标记)窗口顶端边框上的"+"图标处左键点击，如图T17.4所示。 |
| 33. | 请在New Custom Token(新自定义标记)文本处输入"0.313 ratio"。 |
| 34. | 点击Enter键；“0.313 ratio”将被高亮显示为蓝色。 |
| 35. | 请在Custom Tokens(自定义标记)窗口的下半部分，Enter Custom Token formula below(请在下方输入自定义标记公式)的下方点击鼠标左键。 |
| 36. | 输入“=”(图T17.6)。 |
| 37. | 将光标放在0.313ul CD64绘图上，如图T17.13中的红色边框所示。 |
| 38. | 按下鼠标左键不放。 |
| 39. | 一直按住鼠标左键，把绘图拖到Custom Tokens(自定义标记)窗口的下半部分。 |
| 40. | 当光标在"="右侧时(如图T17.13所示)，请松开鼠标。 |
Figure T17.13 Dragging and Dropping the 0.313μl CD64 Plot onto the Custom Token Formula
此时，Paste Special(选择性粘贴)对话框将出现，如图T17.14所示。
| 41. | 选择Statistic token(统计标记)，如图T17.14中的蓝色高亮所示。 |
| 42. | 点击OK。 |
Figure T17.14 Paste Special Dialog
此时，Edit Statistic(编辑统计)对话框的Statistic(统计)页面将出现，与之前Create Statistic(创建统计)对话框类似，如前图T17.10所示。再次，我们会使用和图T17.10中相同的统计设置来定义“0.313 ratio”自定义标记的分子。当我们把绘图拖拽到Custom Tokens(自定义标记)公式窗口中时，数据源已经被设置为0.313μl CD64绘图。以下步骤均针对图T17.10。
| 43. | 从Gate:(门:)下拉列表中选择Monos(单核细胞门)。 |
| 44. | 从Statistics:(统计:)列表框中选择Y-median(Y-中值)。 |
| 45. | 选择OK。 |
这样我们就为“0.313 ratio”自定义标记设置好了分子。现在我们需要设置分母，方法仍然是拖放0.313ul CD64绘图。
| 46. | 在自定义标记公式窗口中的“Statistic: Y Median for Plot #5, overlay #1, Additional Gate: Monos”文本后，输入'/'。 |
| 47. | 将光标放在0.313ul CD64绘图上，如图T17.13中的红色边框所示。 |
| 48. | 按下鼠标左键不放。 |
| 49. | 一直按住鼠标左键，把绘图拖到Custom Tokens(自定义标记)窗口的下半部分。 |
| 50. | 当把绘图拖到"/"右侧时，请松开鼠标左键。 |
此时，Paste Special(选择性粘贴)对话框将再次出现，如前图T17.14所示。
| 51. | 选择Statistic token(统计标记)，如图T17.14中的蓝色高亮所示。 |
| 52. | 点击OK。 |
此时，Edit Statistic(编辑统计)对话框的Statistic(统计)页面将出现，与之前的Create Statistic(创建统计)对话框类似，如前图T17.10所示。我们将再次使用Y-median(Y-中值)来作为统计选项。但这次我们将选择Lymphs(淋巴细胞)门来作为分母。
| 53. | 请从Gate:(门:)下拉列表中选择Lymphs(淋巴细胞门)。 |
| 54. | 从Statistics:(统计:)列表框中选择Y-median(Y-中值)。 |
| 55. | 选择OK。 |
此时，Custom Tokens(自定义标记)窗口会出现，如图T17.15所示，其中自定义标记“0.156 ratio”和“0.313 ratio”已被分别定义好了。
Figure T17.15 Custom Token Definitions for the First Two CD64 Concentrations
现在我们要定义针对0.625μlCD64数据的自定义标记。这次，我们不会从定义自定义标记的第一步开始，而是通过来复制和粘贴“0.313 ratio”自定义标记来完成。
| 56. | 请在Custom Tokens(自定义标记)窗口的顶端边框上的"+"图标处左键点击。 |
| 57. | 请在New Custom Token(新自定义标记)文本处输入"0.625 ratio"。 |
| 58. | 点击Enter键；“0.625 ratio”将被高亮显示为蓝色。 |
| 59. | 请在Custom Tokens(自定义标记)上面的窗口中选择“0.313 ratio”。 |
| 60. | 请把光标放在Custom Tokens(自定义标记)窗口下半部分"="的前面。 |
| 61. | 请按下鼠标左键不放，选择自定义标记“0.313 ratio”的文本定义。 |
| 62. | 使用键盘上的CTRL+C键来复制这一文本。 |
| 63. | 在Custom Tokens(自定义标记)的上半部分窗口中选择“0.625 ratio”。 |
| 64. | 请把光标放在Custom Tokens(自定义标记)窗口的下半部分。 |
| 65. | 使用键盘上的Ctrl+V键来粘贴文本。 |
| 66. | 请把光标放在定义分子“Statistic: Y Median for Plot #5, overlay #1, Additional Gate: Monos”的文本上。 |
| 67. | 请双击文本，调出Edit Statistic(编辑统计)对话框中的Data Source(数据源)项目类别。 |
| 68. | 选择Color Dot - 0.625ul CD64.fcs.DNS (SS Lin vs.FL 8 Log)。 |
| 69. | 选择OK。 |
| 70. | 请把光标放在定义分母"Statistic: Y Median for Plot #5, overlay #1, Additional Gate: Lymphs"的文本上。 |
| 71. | 请双击文本，调出Edit Statistic(编辑统计)对话框中的Data Source(数据源)项目类别，类似于Create Statistic(创建统计)对话框，如前图T17.9所示。 |
| 72. | 选择Color Dot - 0.625ul CD64.fcs.DNS (SS Lin vs.FL 8 Log)。 |
| 73. | 选择OK。 |
此时，“0.625 ratio”自定义标记就被设置为使用0.625μlCD64数据的自定义标记。我们现在要使用弹出菜单中的复制和粘贴命令，用0.625 ratio自定义标记来衍生出“1.25 ratio”自定义标记。
| 74. | 将光标放在Custom Tokens(自定义标记)窗口中“0.625 ratio”文本上。 |
| 75. | 请右键点击，调出弹出菜单。 |
| 76. | 从弹出菜单中选择Copy Custom Token(s)(复制自定义标记)(图T17.16)。 |
Figure T17.16 Copy Custom Token(s) Item in the Pop-up Menu
| 77. | 请把光标放在Custom Tokens(自定义标记)窗口中“0.625 ratio”文本的下方。 |
| 78. | 请右键点击，调出弹出菜单。 |
| 79. | 从弹出菜单中选择Paste Custom Token(s)(粘贴自定义标记)(图T17.17)。 |
Figure T17.17 Paste Custom Token(s) Item in the Pop-up Menu
这时有两个自定义标记0.625 ratio。现在我们要修改刚刚出现的这个标记的名字以及其定义，让其使用1.25μlCD64绘图数据。
| 80. | 请把光标放在Custom Tokens(自定义标记)窗口中“0.625 ratio”文本处，如图T17.18中的蓝色高亮显示。 |
| 81. | 请右键点击，调出弹出菜单。 |
| 82. | 从弹出菜单中选择Rename(重命名)选项。 |
| 83. | 请输入"1.25 ratio"文本。 |
| 84. | 请把光标放在Custom Tokens(自定义标记)窗口下半部分中的分子定义标记“Statistic: Y Median for Plot #11, overlay #1, Additional Gate: Monos”上，如图T17.18中的光标所示。 |
| 85. | 请双击文本，调出Edit Statistic(编辑统计)对话框中的Data Source(数据源)项目类别。 |
| 86. | 选择Color Dot - 1.25ul CD64.fcs.DNS (SS Lin vs.FL 8 Log)。 |
| 87. | 选择OK。 |
| 88. | 请把光标放在定义分母"Statistic: Y Median for Plot #11, overlay #1, Additional Gate: Lymphs"的标记上。 |
| 89. | 请双击文本，调出Edit Statistic(编辑统计)对话框中的Data Source(数据源)项目类别，类似于Create Statistic(创建统计)对话框，如前图T17.9所示。 |
| 90. | 选择Color Dot - 1.25ul CD64.fcs.DNS (SS Lin vs.FL 8 Log)。 |
| 91. | 选择OK。 |
Figure T17.18 Editing Custom Token 1.25 Ratio
请使用前面介绍的复制和粘贴方法，继续定义2.5μl、5μl和10μlCD64绘图对应的自定义标记。请重复第75步到第92步，但请用2.5μl、5μl和10μl数据来替代1.25μl数据，直到所有的自定义标记都被定义好。最后自定义标记窗口应该看起来如图T17.19所示。
Figure T17.19 Final Custom Token Definitions
在下一节中，我们将Create a Custom Data Table(创建自定义数据表格)。