在本节教程中,我们将使用的版面文件带有FITC MESF微球绘图、含自定义标记的自定义数据组。
1. | 打开教程样本数据库中的Calculating MESF From Regression(从回归计算MESF)中的FITC MESF Beads.fey文件。 |
这时,会出现以下版面,如图T27.1所示。
Figure T27.1 The FITC MESF Beads.fey Layout
在版面的左上角有一个针对FITC微球的彩色散点图,其中有单个微珠事件的圈门。散点图的右侧是一个FITC柱状图,显示门"FITC Beads"中的数据;图中有五个应用在FITC微球群上的标记。
在两个图的下方是名称为"FITC MESF"的电子表格。要更多地了解如何创建电子表格,请查看创建一个用于分析的电子表格的教程。
请花少许时间来双击查看电子表格中的每一列以检查数据输入。第一列是标记名称,是手动输入的数据值。第二列是柱状图中每个标记的中间数,它是由统计标记来定义的。(请见操作手册中的Inserting a Token or Custom Token in a cell chapter(在单元格中插入标记或自定义标记那一章)。
第三列是每一微球群对应的MESF FITC数值,它是手动输入的数据值。第二列是每一微球群对应的MESF FITC数值,它是手动输入的数据值。第四列和第五列是中间数以及MESF微珠群的对数值,它们是由自定义标记定义的。在这种情况下,使用Log基数10计算Log的公式为:=LOG(数目),此处的数目一栏可以是手动输入的数目,数字标记或,如在这种情况下的单元格引用。
注意:电子表格最右下角的单元格(位于LogMESF列)是空的。我们现在将通过复制粘贴该列中其他单元格中的一个的内容来填充该单元格所需的值。
2. | 选择Cell E3,如图T27.2所示。![]() |
Figure T27.2 Copying and pasting the E3 cell content into the E6 cell to complete the spreadsheet.
3. | 点击CTRL键+C来复制单元格内容 |
4. | 选择单元格E6,如图T27.2![]() |
5. | 点击CTRL键+V来粘贴单元格内容 |
现在我们就已经完成了电子表格,如图T27.3所示。
Figure T27.3 The spreadsheet successfully complete.
现在,我们要使用电子表格中的FITC微珠数据来插入一个带回归分析的散点图。
4. | 请选中电子表格,选中后它应该有一个绿色边框。 |
5. | 请选择Insert(插入)标签→2D Plots(二维绘图) →Scatter with Regression(带回归分析散点图)的命令来查看FCS的文本头信息。 |
6. | 请点击版面中电子表格下方的空白区来插入带回归分析散点图。 |
使用自定义电子表格前两列(“A”和“B”)中的数据创建一个空图。
我们现在将格式化回归散点图以显示来自电子表格的中值和MESF数据(即分别为列“B”和“C”)。
7. | 请把光标放在y-轴标签"B"上。 |
8. | 请点击鼠标左键并按住不放,这时会出现电子表格列的列表,如图T27.4所示。 |
9. | 当光标移到"C"上时,请松开鼠标,如图T27.5中的蓝色高亮标示。 |
10. | 对于X轴,重复7到9,选择“B”作为显示列。 |
Figure T27.4 Selecting 'LogMESF' Data for the Y-axis
空白图现在用黑色的电子表格的列B和C的数据以及红色的最佳拟合回归曲线填充,如图T27.5所示。
注意:此回归曲线的类型是默认的第一选项(线性),它适用于这个数据集。当进行其他数据集分析时,可从带回归分析的散点图的Formatting(格式化)选项中,来选择回归曲线类型。该回归曲线的平滑度也是可以调整的。请参见手册中此章节进行详细了解。
Figure T27.5 Scatter with Regression Plot of Median and MESF Data from the Data Grid
我们现在将格式化带回归分析散点图以在Y轴上显示电子表格的“Log MESF”(即列'E')数据。
11. | 请把光标放在y-轴标签"C"上。 |
12. | 请点击鼠标左键并按住不放,这时会出现电子表格列的列表。 |
13. | 当光标在"E"上时,请松开鼠标。 |
现在,带回归分析的散点图应该进行了更新,显示Y-轴变成了对应的"LogMESF"(即列“E”)数据。
现在我们将X轴参数更改为X轴上电子表格的“LogMedian”(即列“D”)数据。
10. | 请把光标放在x-轴名称"B"上。 |
11. | 请点击鼠标左键并按住不放,这时会出现电子表格列的列表。 |
12. | 当光标在"D"上时,请松开鼠标。 |
带回归分析的散点图现在更新以反映对X轴的“LogMedian”(即列'D')数据的选择,并且如图T27.6中所示。
Figure T27.6 Scatter with Regression Plot with Log Median and Log MESF Values from the Spreadsheet.
我们现在要对带回归分析的散点图进行格式化,以便更好地观察五个数据点。
13. | 请右键点击带回归分析的散点图。 |
14. | 从弹出菜单中选择Format(格式化)选项。 |
15. | 选择Axis(坐标轴)种类(图T27.7a![]() |
16. | 将Y Axis Range Minimum(Y轴范围最小值)改为3,Maximum(最大值)改为7(图T27.7a![]() |
17. | 在选择轴的列表中请选择X 坐标轴(图T27.7a![]() |
18. | 将X Axis Range Minimum(X轴范围最小值)改为1并且Maximum(最大值)改为4。 |
Figure T27.7a Formatting axis for Scatter with Regeression plot.
19. | 点击Overlays(数据层)类型(Figure T27.7b,![]() |
20. | 从2D Unbinned Overlays列表中点击第二个数据层("2-Linear")(Figure T27.7b![]() |
21. | 从弹出菜单中的Line Options(线选项)从中选择Connecting Lines选项 (Figure T27.7b![]() |
22. | 将线粗设置为1.5(图T27.7b![]() |
23. | 点击OK(图T27.7b![]() |
Figure T27.7b Formatting fitting line in Scatter Plot with Regression.
这时,带回归分析的散点图看起来如图T27.7c。它已经被定义了个试,以使所有数据点进入范围并且增加红色回归曲线的宽度。
Figure T27.7C Scatter Plot with Regression reformatted.