通道校正工具
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定量流式细胞仪用来确定标识所有微粒的实际荧光配位基数(荧光染料或荧光染料及蛋白质的连接分子)。该方法需要用已知的荧光染料标准物来校正荧光通道数。该标准物把观察到的荧光强度换算为实际连接荧光染料分子的数目。
有几家公司特别设计出了有不同荧光强度的微珠,每个微珠上染料分子数精确控制。通过做一条关联通道编号和每个微珠上染料分子数目的曲线,可以精确判定细胞抗原分子、抗体分子和其它有用的标记分子的数目。
这类工作以前非常费力,要求用户使用流式细胞软件从微珠和样品获得一系列统计数据,然后把统计数据输入电子表格,绘成校正曲线,确定标准通道值,最后再使用该电子表格进行进一步的计算,将统计数据转化为每个细胞的配体数。
FCS Express可把整个程序自动化。一旦做好了通道校正,所有绘图会自动显示校正坐标轴,统计数据会显示为校正数值。要设置通道校正,必须有一组携带荧光分子数目确定的微珠做对照。另外,必须知道有效的荧光强度-蛋白质比率,以决定细胞上某一标记分子的数目。