设置微珠门和标记 |
|
|
|
|
|
设置微珠门和标记 |
|
|
|
设置微珠门和标记
|
设置微珠门和标记 |
|
|
|
|
|
设置微珠门和标记 |
|
|
|
|
|
||
在本例中，我们会:
| • | 学习如何来设置微珠门。 |
| • | 学习如何把标记应用到微珠的荧光信号峰上。 |
| • | 在FCS Express中设置通道校正的默认值。 |
| 1. | 请打开一个新的空白版面。 |
| 3. | 请在微珠周围创建一个多边形门。 |
这个门应该看起来如图T23.1中的绘图所示。要想更多地了解如何创建门，请参考门操作教程。
图T23.1 Polygonal Gate (多边形门)
| 4. | 请为同一个文件插入一个新的柱状图。 |
| 5. | 请将其设置为显示FL3-H通道。 |
| 6. | 请把Beads(微珠)门应用到新的柱状图上。 |
这时柱状图应该看起来如图T23.2所示。
图T23.2 Histogram of FL3-H with Beads Gate Applied (应用了微珠门的FL3-H柱状图)
这时的柱状图上会显示五个校正颗粒对应的荧光信号峰以及一个"空白"峰。我们现在要在每个峰上设置一个标记来对这些峰进行进一步描述。
| 7. | 请选择Gating(门操作)→Create Gates(创建门)→Create Marker(创建标记)命令。 |
| 8. | 请把光标放在柱状图内部、最亮的峰的左边。 |
| 9. | 按下鼠标左键，把鼠标拖到信号峰的右边。 |
| 10. | 当光标在信号峰的右侧时，请松开鼠标键。请不要选中信号峰后面代表双细胞的"尾巴"信号区(图T23.3中红圈所示)。 |
创建标记后，用户可以将标记选中，移动整个标记，或修改标记边界。要想更多地了解如何修改标记的大小，请查看教程中介绍把标记链接到门的那部分。
请为其它四个峰，从最亮的峰到最暗的峰，重复第7步到第9步，请不要考虑和"空白"微珠相关联的最低的信号峰。用户现在应该有五个标记，每个标记对应一个荧光峰，如图T23.3所示。
图T23.3 Markers M1 through M5 for the five Fluorescent Peaks (red circles indicate doublets) (标记M1到M5对应五个荧光峰(红圈代表双连体细胞))
注: FCS Express默认的设置是在数轴上使用通道校正。因此，在设置通道校正之前需要设置一下显示微珠的柱状图，让它不要使用通道校正，因为这是我们原始的对照。
| 11. | 请右键点击在FL3通道显示校正微珠的柱状图，调出相关的弹出菜单。 |
| 12. | 请从弹出菜单上选择Format(格式) 。 |
这时会出现针对该柱状图的Formatting(格式化)对话框。
| 13. | 请从Formatting(格式化)对话框左边的类别选项中选择Histogram(柱状图)→Histogram Specific Options(柱状图特定选项)。 |
这时会出现Formatting(格式化)对话框中的Histogram Specific Options(柱状图特定选项)(图T23.4)。
| 14. | 请取消对Use channel calibration on axis(在数轴上使用通道校正)选项的勾选，如图中的光标所示(图T23.4)。 |
| 15. | 请点击OK。 |
图T23.4 Formatting Dialog -- Unselecting Use channel calibration on axis (格式化对话框 -- 请取消对"在数轴上使用通道校正"的勾选)
在下一节中，我们将设置通道校正工具。