要创建新的通道校正:
• | 将微球数据用柱状图显示,然后创建一标识来界定所以微球,如图15所示1。 |
Figure 15.1 Setting Up Markers for Channel Calibration
• | 请确保,用来校正的、作为原始数据源的绘图,其自身没有校正应用于其中,这可以通过通道校正教程中的第11-15步来确认。 |
• | 请选择View(视图)标签→Tools(工具)→Channel Calibration(通道校正)命令。此时,Channel Calibration Window(通道校正窗口)将出现(图152)。 |
Figure 15.2 Channel Calibration Window
• | 点击Add(添加)来创建一个新的通道校正。此时,New Calibration(新校正)对话框将出现(图153)。 |
Figure 15.3 New Calibration Dialog
• | 请从Create calibration for(为...创建校正)下拉列表选择想要校正的参数。 |
• | 请从Calculate regression from(从...计算回归)下拉列表中,选择用来校正的、作为数据源的柱状图。 |
• | 从Overlay(数据层)下拉菜单选择柱状图上正确的数据层。当选中柱状图时,标识盒会自动在柱状图上为每个标识创建一项。您可通过改变Number of peaks to use for regression(拟合时要用的峰值数)域中的数值,来选择更少的标识。但必须用至少三个标识来计算拟合。 |
• | 在标识下方为该峰值输入每个微球上的分子数目。该数目由微球的制造商提供。 |
• | 点击Calculate(计算)来计算新通道校正。新校正的公式(Slope(斜率)、Y intercept(Y轴截距)、Correlation coefficient(相关系数))会出现在Results(结果)框中。 |
• | 此Dye molecules:Antibodies(染料分子:抗体)(也成为F:P)比一般是1:1,但也可改成其它值。F:P比由实验中使用的抗体生产公司提供。 |
• | 点击OK来接受新校正。 |