设置微球门和标记

Contents

在本例中，我们会：

•	学习如何来为微球设置门。

•	学习如何把标记应用到微球的荧光信号峰上。

•	设置FCS Express中通道校正的默认值。

1.	请打开一个新的空白版面。

2.	请插入在Tutorial Sample Data archive(教程样本数据库)中的名为 ChannelCalibration.001数据的前向对侧向的散点图。要想更多地了解如何插入绘图，请参见“插入绘图”教程。

3.	请在微球周围创建一个多边形门。

这个门看起来应如图T23.1中所示。要想更多地了解如何创建门，请参考“门操作”教程。

Figure T23.1 Polygonal Gate

4.	请用同一个文件插入一个新的柱状图。

5.	请将其设置为显示FL3-H通道。

6.	将创建微球门应用到新的柱状图上。

这时柱状图应该看起来如图T23.2所示。

Figure T23.2 Histogram of FL3-H with Beads Gate Applied

这时，柱状图上会显示校正颗粒对应的５个荧光信号峰外加一个"空白"峰。现在，我们要在每个峰上设置一个的表示来对这些峰进行描绘。

7.	请选择Gating(门操作)→Create Gates(创建门)→Create Marker(创建标识)命令。

8.	请把光标放在柱状图内部、最亮的峰的左边。

9.	按下鼠标左键，把鼠标拖到信号峰的右边。

10.	当光标在信号峰的右侧时，请松开鼠标键。请注意，不要选中信号峰后面代表双细胞的"尾巴"信号区(图T23.3中红圈所示)。

创建标识后，用户可以将标识选中，来移动标识的两段或者整个标记，也可调整标识大小。要想更多地了解如何修改标识的大小，请查看“把标记链接到门”章节。

请为其它四个峰，从最亮的峰到最暗的峰，重复第7步到第9步，请不要考虑和"空白"微球相关联的最低的信号峰。现在，您应该有五个标记，每个标记对应一个荧光峰，如图T23.3所示。

Figure T23.3 Markers M1 through M5 for the five Fluorescent Peaks (red circles indicate doublets)

注意：FCS Express默认的设置是在坐标轴上使用通道校正。因此，在设置通道校正之前需要设置一下显示微球的柱状图，让它不要使用通道校正，因为那是我们原始的对照。

11.	请右键点击在FL3通道显示校正微球的柱状图，调出相关的弹出菜单。

12.	请从弹出菜单选择 Format(格式)。

针对该柱状图的Formatting(格式化)对话框将出现。

13.	请从Formatting(格式化)对话框左边的类别选项中选择Histogram(柱状图)→Histogram Specific Options(柱状图特定选项)。

此时，Formatting(格式化)对话框中的Histogram Specific Options(柱状图特定选项)项目类别将出现(图T23.4)。

14.	不选中Use channel calibration on axis(在数轴上使用通道校正)选项，如图中的光标所示(图T23.4)。

15.

点击OK。

Figure T23.4 Formatting Dialog -- Unselecting Use channel calibration on axis

在下一节中，我们将设置通道校正工具。